使用基于镧系元素掺杂纳米颗粒的侧流免疫测定法快速灵敏地检测抗 SARS-CoV-2 IgG
2023-03-08 22:54:25 点击：
LNP和功能化LNP探针的表征
大多数生化测定是在溶液中进行的。在水性环境中，由于5D的非辐射活化导致能量损失，镧系螯合物的发射受到强烈抑制0水分子的O-H振动状态。(22)因此，优选将镧系螯合物包封在水分散性球体中。LNPs的最大荧光发射峰在∼615 nm处得到;峰窄且对称（图2a）。对功能化前后LNP的物理表征进行了动态光散射分析。LNP的大小和表面zeta电位的变化（图 2 b和2c）表明M-HIgG和RIgG抗体成功偶联。
图2
图2.LNP和功能化LNP探针的物理性质：（A）吸收和发射光谱，（B）裸和共轭LNP的尺寸分布，以及（C）zeta电位分布。
优化
免疫反应时间显著影响荧光信号。在该测定中，测量阳性样品以确定最佳测定时间。从孵育开始开始2-0分钟内每16分钟测量一次At/Ac比（R）。R在前4分钟内迅速增加，并在10分钟达到平台期（见图3）。根据该结果，总测定时间确定为10分钟。
图3
图3.优化免疫反应时间。
再现性
我们测定的重现性是根据测定内和测定间变异评估的。连续7天每天测量71个样品9次，并计算变异系数（CV）值。测定内和测定间CV分别为69.11%–51.14%和63.1%–15.<>%（见表<>）。由于CV均为<<>%，我们得出结论，我们的检测是可重复的。
表 1.开发检测试剂盒的重现性测试
| 检测内 | 检测间 | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 样本 | 平均值，R | 标准偏差，标清 | 变异系数，CV （%） | 平均值，R | 标准偏差，标清 | 变异系数，CV （%） |
| 一个 | 0.029 | 0.0028 | 9.66 | 0.034 | 0.0048 | 14.12 |
| B | 0.039 | 0.0037 | 9.49 | 0.053 | 0.0061 | 11.51 |
| C | 0.256 | 0.0208 | 8.13 | 0.231 | 0.0338 | 14.63 |
| D | 0.390 | 0.0301 | 7.72 | 0.468 | 0.0680 | 14.53 |
临床样本检测
为了确定我们测定的适当临界值，我们测试了51个正常血清样品和7个通过RT-PCR确定为阳性的样品。R的临界值（正常样本的平均值加上标准差的3倍）计算为0.0666。RT-PCR阳性的所有7个样品的R值均为>0.0666（图4），表明开发的检测方法可以检测阳性样品中的抗SARS-CoV-2 IgG。
图4
图4.58份血清样本的检测结果，包括51份正常样本和7份阳性样本。[符号图例：（*） P < 0.05，（****） P < 0.0001（方差单因素分析和费舍尔最小显著差异检验）。
为了确认我们检测的诊断准确性，我们用它来测试7个RT-PCR阳性的样本和12个阴性但临床可疑的样本。该 χ2试验显示，McNemar检验的P值为1.0，kappa检验得到的值为0.890（P<0.001）（见表2）。因此，使用我们开发的测定获得的结果与通过RT-PCR获得的结果之间没有统计学上的显着差异。
表 2.χ2测试开发的检测方法和RT-PCR的诊断结果
| 逆转录聚合酶链反应检测 | |||
|---|---|---|---|
| 阳性 | 阴性 | 总 | |
| 开发LFIA | |||
| 阳性 | 7 | 1 | 8 |
| 阴性 | 0 | 11 | 11 |
| 总 | 7 | 12 | 19 |
在我们的检测中，RT-PCR 呈阴性的 12 个临床可疑样本中的一个被发现为 SARS-CoV-2 IgG 阳性。与其他疑似病例不同，该病例不仅出现发热，而且临床高度怀疑。RT-PCR检测阴性结果引起临床对该病例管理的担忧。根据我们的IgG测试结果，RT-PCR测试结果更有可能是假阴性。目前，预防交叉感染在疫情控制中非常重要;该病例应及时隔离治疗。
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